傳統(tǒng)的磁珠分選是基于抗原抗體特異性識別的原理,利用特定抗體偶聯(lián)磁珠來捕獲目的細胞。然后在高強度磁場作用下,將磁珠標記細胞和沒有標記的細胞分開。根據(jù)分選過程中標記的細胞類型的不同,可將分選分為陽性分選(正選)和陰性分選(負選)。
陽性分選(正選)是指對目的細胞進行標記,直接獲得目的細胞。適用于比例較小的細胞群,以及從各種樣本來源中得到目的細胞,尤其是對于一些稀有樣本或者疾病來源的樣本。
◆ 優(yōu)點:能夠獲得高純度的目的細胞,操作簡便。
◆ 缺點:細胞被標記了抗體和磁珠。
陰性分選(負選)是指對非目的細胞進行標記和去除,來得到目的細胞。避免直接標記目的細胞,從而來減少細胞活化可能,適用于比較常規(guī)的樣本,例如人外周血、小鼠脾臟等。
◆ 優(yōu)勢:可以保持目的細胞未受刺激的原始狀態(tài),得到的細胞不帶有任何抗體和磁珠標記。
◆ 缺點:相對陽選而言純度較低,成本較高。
那么陰選和陽選究竟應(yīng)該怎么選擇呢?
今天為您介紹的這款產(chǎn)品讓您無需迷茫,人CD8+細胞無痕分選試劑盒,兼具了陽選和陰選的優(yōu)點。能夠使用陽選的方式分選CD8+細胞,然后通過無痕洗脫,讓您在擁有高純度的同時,得到的細胞還不帶有任何磁珠和其他標記。
1 原理
與傳統(tǒng)的陽選使用的特異性抗體不同,人CD8+細胞無痕分選試劑盒采用的是適配體,這是一段特異性的短鏈核苷酸序列。由于它的三級結(jié)構(gòu),能夠通過其三維構(gòu)象識別靶標分子,并具有很高的結(jié)合親和力(圖1)。
圖1
重要的是,這種適配體標記是可逆的,是可以去除的。利用與適配體互補的寡核苷酸將細胞洗脫下來。
實驗過程包括分選和洗脫:
分選過程,帶有磁珠的適配體與PBMC孵育,在磁場作用下,被標記的目的細胞和沒有標記的細胞分開(圖2a)。
圖2a
洗脫過程,帶有磁珠的細胞與適配體互補的寡核苷酸孵育,帶有磁珠的適配體從細胞上脫落,在磁場作用下,磁珠以及適配體和目的細胞分開(圖2b)。
圖2b
可以看出,整個洗脫過程操作非常簡單,除了磁極,無需任何其它工具,只需要加入互補的寡核苷酸鏈,室溫孵育10分鐘后,通過磁極分離細胞和磁珠,即可實現(xiàn)CD8+細胞的洗脫。洗脫下來的CD8+細胞不帶有任何標記。
2 相關(guān)數(shù)據(jù)
我們一起來看看,人CD8+細胞無痕分選試劑盒的試劑應(yīng)用效果怎么樣?
| 高純度
起始樣本為新鮮提取的人的PBMC細胞,起始樣本和分選后的CD8+細胞的純度分別為23.0%和98.2%(圖3)。
圖3
| 無痕
洗脫后的細胞CD8+細胞純度≧98%,活率≧90%。整個過程細胞得率在70~90%之間。與國外某進口品牌的陰選相比,純度更高(圖4)。
圖4
3 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息 種屬 分選方法
CD3+ T細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
CD4+ T細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
CD8+ T細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
單核細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
B細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
NK細胞分選試劑盒 人/小鼠 陰選/陽選
CD8+細胞無痕分選試劑盒 人 無痕分選
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