肝臟是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。常用的體外模型有肝微粒體、肝S9、肝胞質(zhì)液、原代肝細(xì)胞、肝組織切片、重組人代謝酶等。其中，原代肝細(xì)胞因具有較好的體外試驗重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標(biāo)準(zhǔn)"，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)研究中。

1    原代肝細(xì)胞的特點(diǎn)

原代肝細(xì)胞(Primary hepatocytes)是指從動物肝臟直接分離的肝實質(zhì)細(xì)胞。原代肝細(xì)胞作為一種體外模型，具有其它體外模型不可替代的優(yōu)點(diǎn)：①與體內(nèi)環(huán)境保持一致，酶量和輔助因子水平都是正常的生理濃度，可以在接近生理狀態(tài)的的情況下研究藥物的代謝和毒性；②較好保留和維持了肝細(xì)胞的完整形態(tài)和肝細(xì)胞體外代謝活性，真實反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況；③無須擔(dān)心動物實驗的倫理問題，亦可減少動物實驗所需要的的成本開支，實現(xiàn)了減少（Reduction）、替代（Replacement）、優(yōu)化（Refinement）的 3R 倫理原則。

肝細(xì)胞被分離后，可進(jìn)行貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞在最開始的4h內(nèi)細(xì)胞色素P450酶的活性最為和體內(nèi)一致，隨時間的延長而迅速下降；貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞有足夠的時間從損傷中恢復(fù)過來，具有正常細(xì)胞的形態(tài)特征。隨著3D培養(yǎng)技術(shù)的出現(xiàn)，原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍也進(jìn)一步得到了擴(kuò)展。

2    原代肝細(xì)胞的應(yīng)用

隨著技術(shù)水平的不斷提高，原代培養(yǎng)的動物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究：①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究；②預(yù)測和解釋藥物與藥物之間的相互作用；③研究藥物的細(xì)胞毒性等。

2.1  原代肝細(xì)胞在藥物代謝中的應(yīng)用

原代肝細(xì)胞作為藥物代謝研究的經(jīng)典模型，在探討藥物在肝中的代謝途徑和藥代動力學(xué)的研究中發(fā)揮著重要作用。將苗頭化合物與懸浮原代肝細(xì)胞共孵育，不但可對化合物在肝細(xì)胞中的代謝穩(wěn)定性進(jìn)行研究，而且還可得到相對多量的高純度的代謝產(chǎn)物，在研究藥物生物轉(zhuǎn)化特征，尋找藥物可能的代謝物方面優(yōu)勢顯著。尤其是當(dāng)有證據(jù)顯示化合物的生物轉(zhuǎn)化途徑為二相代謝、水解作用或肝微粒體中非特異性蛋白結(jié)合很高、肝微粒體中代謝不明顯的時候，原代肝細(xì)胞更為不可替代的體外模型。

2.2  原代肝細(xì)胞在藥物-藥物相互作用研究中的作用

在臨床應(yīng)用中患者經(jīng)常會同時使用多種藥物，這些藥物可能會產(chǎn)生藥物-藥物相互作用（Drug-drug interaction，DDI，簡稱藥物相互作用），有可能導(dǎo)致嚴(yán)重不良反應(yīng)或改變治療效果。因此，有必要對DDI發(fā)生的可能性和嚴(yán)重性及其影響程度進(jìn)行科學(xué)評估。DDI評估通常從體外試驗開始，確定可能影響藥物處置的因素以闡明潛在的DDI機(jī)制，并獲得用于進(jìn)一步研究的動力學(xué)參數(shù)，其主要內(nèi)容包括：確定藥物的主要消除途徑；評估相關(guān)代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體對藥物處置的貢獻(xiàn)；考察藥物對代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響。貼壁原代肝細(xì)胞即為DDI體外評估的經(jīng)典模型，尤其是在評估化合物是否為代謝酶的誘導(dǎo)劑方面更是扮演著角色。

2.3  原代肝細(xì)胞在毒理學(xué)中的作用

藥物的毒性研究是藥物研究的重要組成部分。藥物通過肝臟代謝后，大多數(shù)藥物的毒性被消除，但同時也有一些無毒或低毒的物質(zhì)通過生物轉(zhuǎn)化后轉(zhuǎn)變成有毒甚至毒性更大的物質(zhì)，因此肝臟便必然成為研究藥物毒性的重要靶器官。原代肝細(xì)胞即為一個較好的篩選模型，尤其是在檢測結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物時，原代肝細(xì)胞的角色更為重要。

3    IPHASE原代肝細(xì)胞產(chǎn)品

IPHASE/匯智和源憑借多年的技術(shù)能力和技術(shù)經(jīng)驗的積累，不斷摸索和優(yōu)化原代肝細(xì)胞分離過程，現(xiàn)已形成猴、犬、大鼠、小鼠等原代肝細(xì)胞產(chǎn)品。

l  合規(guī)性

合規(guī)是研究的開始，產(chǎn)品來源清晰，免除了后顧之憂。

l  安全性

生產(chǎn)產(chǎn)品的動物均經(jīng)過傳染源檢測，使用安全、放心。

l  純度高

肝實質(zhì)細(xì)胞的占比可達(dá)95%以上。

l  復(fù)蘇率高

凍存復(fù)蘇率可達(dá)95%以上。

l  活性高

生產(chǎn)工藝成熟，盡可能的保證了酶活性。

l  可定制

可根據(jù)客戶特殊需求，提供特殊種屬、特殊組織細(xì)胞的定制服務(wù)。

l  高活性

  目的細(xì)胞活性可達(dá)95%以上。

3.1  經(jīng)代謝驗證原代肝細(xì)胞

代謝穩(wěn)定性反映了化合物對生物轉(zhuǎn)化的敏感性，若代謝穩(wěn)定性低，意味著化合物在體內(nèi)較容易被代謝，往往預(yù)示著不良的藥代動力學(xué)性質(zhì)，如口服利用度低、作用時間短；代謝穩(wěn)定性試驗得到的人體外內(nèi)在清除率Clint可用于進(jìn)行人體清除率的預(yù)測；各種屬間代謝速率的一致性信息可為安評動物種屬的選擇提供一定的數(shù)據(jù)支持。且還可得到相對多量的高純度的代謝產(chǎn)物，在研究藥物生物轉(zhuǎn)化特征，尋找藥物可能的代謝物方面優(yōu)勢顯著。尤其是當(dāng)有證據(jù)顯示化合物的生物轉(zhuǎn)化途徑為二相代謝、水解作用或肝微粒體中非特異性蛋白結(jié)合很高、肝微粒體中代謝不明顯的時候，懸浮原代肝細(xì)胞更為不可替代的體外模型。

3.2  經(jīng)誘導(dǎo)驗證原代肝細(xì)胞

酶誘導(dǎo)是指某些化合物能提高肝臟藥物代謝酶的活性，導(dǎo)致合用的藥物代謝速率加快，使得原藥的血藥濃度下降，使其療效降低或喪失。若藥物A能誘導(dǎo)某代謝酶的活性、而另一同服藥物B為該代謝酶的底物，則A藥有可能造成B藥代謝清除率增加、暴露量降低，從而造成無法達(dá)到預(yù)期的藥效。貼壁培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞是酶誘導(dǎo)研究的經(jīng)典模型，采用倍數(shù)變化方法，使用由已知的陽性和陰性對照藥物校準(zhǔn)的體外系統(tǒng)，將藥物與細(xì)胞共孵育，測定孵育后CYP酶的mRNA表達(dá)水平倍數(shù)變化，以評估在研藥物是否為酶的誘導(dǎo)劑。

3.3  經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)體驗證原代肝細(xì)胞

轉(zhuǎn)運(yùn)體（Transporter）是指貫穿于各組織細(xì)胞膜上介導(dǎo)內(nèi)源性或外源性物質(zhì)進(jìn)出生物膜的跨膜蛋白，主導(dǎo)藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程，影響著藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄。原代細(xì)胞來源于完整組織, 可表達(dá)存于該組織的全部轉(zhuǎn)運(yùn)體基因，與體內(nèi)模型相關(guān)性較好，可用于研究藥物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)及臨床藥物的相互作用。尤其是原代肝細(xì)胞可完整表達(dá)肝臟藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體，是評價經(jīng)肝藥物轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及毒性的模型之一。

3.4  3D培養(yǎng)原代肝細(xì)胞

3D細(xì)胞培養(yǎng)是指將具有三維結(jié)構(gòu)的材料與細(xì)胞在體外共同培養(yǎng),使細(xì)胞能夠在載體的三維立體空間結(jié)構(gòu)中遷移、生長，構(gòu)成三維的細(xì)胞載體復(fù)合物。3D培養(yǎng)類似于細(xì)胞在體內(nèi)的生長方式，既能保留體內(nèi)細(xì)胞微環(huán)境的物質(zhì)及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，又能展現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)的直觀性及條件可控性的優(yōu)勢。3D培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞可提供與體內(nèi)相似的支架系統(tǒng)，創(chuàng)建與體內(nèi)類似的生長環(huán)境，具有與來源組織十分接近的結(jié)構(gòu)特征和功能特性，在藥物代謝、毒性評估等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗，推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

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