av网站,色屁屁WWW免费看欧美激情,国产精品99久久久久久久女警,免费人成自慰网站

您好!歡迎訪問匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

400-127-6686

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 彗星試驗需要注意的事項

彗星試驗需要注意的事項

更新時間:2023-02-09      點擊次數(shù):1251
   彗星試驗也稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗,是一種有效評估DNA損傷的方法。
  其原理是器官或組織經(jīng)處理(如輻射、重金屬等)后,細(xì)胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂,經(jīng)細(xì)胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在電場作用下,DNA 斷片遷移出細(xì)胞核,形成彗星狀的電泳圖譜。正常細(xì)胞的大分子DNA在電場作用下遷移距離較短,DNA仍保留在細(xì)胞核的范圍,形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據(jù)電泳緩沖液的pH值不同,可分為中性彗星實驗(pH=8.4)和堿性彗星實驗(pH>13)。中性彗星實驗主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷,堿性彗星實驗具有更高的靈敏性,可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。
  需要注意的是:
  1、細(xì)胞一定要消化成單個的,如果待測的細(xì)胞是懸浮生長的,或者形狀是圓形的,可以直接用細(xì)胞刮收細(xì)胞做,如果細(xì)胞是非圓形的,例如成纖維細(xì)胞等,一定要用胰酶消化,使之成圓形,然后才可做實驗。很多做彗星實驗總是出不來結(jié)果的,可以考慮下是否是這方面的原因。
  2、細(xì)胞裂解:裂解條件也是一個關(guān)鍵變量,可能會干擾特定類型的DNA修飾(某些DNA烷基化和堿基內(nèi)收)導(dǎo)致的鏈斷裂。因此建議在實驗中對所有玻片的裂解條件盡可能保持恒定。準(zhǔn)備好后,應(yīng)在約2-8攝氏度的弱光條件下(如黃光(或防光),將載玻片浸入冷凍溶解液中至少1小時(或過夜),以避免暴露在可能含有紫外線成分的白光下。在此潛伏期之后,在堿液展開步驟之前,應(yīng)沖洗載玻片以除去殘留的洗滌劑和鹽。這可以用純凈水、中和緩沖液或磷酸鹽緩沖液來完成。
  3、電泳時,電流與電壓強(qiáng)度在每次實驗時要恒定,這樣出來的慧尾才有分析價值,將載玻片隨機(jī)放置在含有足夠電泳溶液的潛電泳裝置的平臺上,使載玻片表面全部覆蓋(每次覆蓋的深度也應(yīng)一致)。
  4、玻片準(zhǔn)備:單細(xì)胞懸液制備后,應(yīng)盡快(最好在1小時內(nèi))制備載玻片,但動物死亡與載玻片制備之間的溫度和時間應(yīng)嚴(yán)格控制,并在實驗室條件下進(jìn)行驗證。
  5、掉膠的問題:蓋玻片最好兩面都涂上剝離硅烷(挺便宜的一大瓶,但是有毒),這樣會好很多
  6、電泳膠使用時需提前水浴融化,禁用微波,清洗玻片時注意不要直接將液體傾倒至膠面,防止脫膠。
  7、使用組織進(jìn)行彗星試驗時,需注意細(xì)胞制備需全程在冰上進(jìn)行,且保證在1小時內(nèi)完成鋪片。
  8、測量方法:彗星應(yīng)該使用自動化或半自動化的圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量評分。用合適的熒光染色劑對載玻片進(jìn)行染色,并在配備有超熒光和適當(dāng)檢測器的顯微鏡或數(shù)碼相機(jī)上進(jìn)行適當(dāng)放大(如200x)的測量。
匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司
地址:北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)科創(chuàng)十四街99號十八號樓1832室
郵箱:support@iphasebio.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
中文字幕人妻中文AV不卡专区 | 超碰97在线| 91精品国产综合久久精品色欲 | 资中县| 国产精品男女| 国内精品久久久久影院蜜芽| 亚洲精品无码久久一线| 无遮挡高潮国产免费观看| 免费日韩| 91精品一久久香蕉国产线看观看| 日韩精品a∨在线观看| 精品成人av一区二区三区| 亚洲精品自在在线观看| 精品亚洲成AV人在线观看| 日韩av| 亚洲av吞精久久久久| 玖玖综合九九在线看| 亚洲AV无码成人精品国产一区| 亚洲成AV人片无码不卡| 狂野欧美激情性XXXX按摩| 在线观看亚洲AV每日更新无码| 被粗汉h玩松了尿进去| 超碰caoporen97人人| 欧美成在线| 精品卡一卡二卡3卡高清乱码| 四虎国产精品永久免费网址| 国产人免费视频在线观看| 多人伦交性欧美| 色婷婷综合久久久久中文字幕| 婷婷夜色| 大j8黑人bbw巨大怪物| 黄色在线看| www.欧美日韩| 久久久久久久爽| 中文字幕亚洲综合久久| 国产区女主播在线观看| 久久精品国产免费观看| 亚洲综合另类小说色区色噜噜| 彭州市| 国产猛男GAY1069视频| 三区视频|