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骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離方法及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-05-13      點(diǎn)擊次數(shù):1434
 

骨髓單個(gè)核細(xì)胞(Bone Marrow Mononuclear Cells,BMMNCs)是一群混合細(xì)胞,其中絕大多數(shù)是早幼粒細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、T細(xì)胞和單核細(xì)胞等,還含有少量的干細(xì)胞,包括間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等,它們密度相近,因此可通過(guò)密度梯度離心法從骨髓液中分離出來(lái)。

 

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原理

單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與其它細(xì)胞不同,在沉降過(guò)程中不同比重的細(xì)胞會(huì)處于不同的分布位置。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)。

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方法

1)  無(wú)菌條件下抽取骨髓于含抗凝劑的采血管內(nèi),將骨髓與生理鹽水或PBS溶液按等比例混勻,備用。

2)  按照稀釋骨髓:細(xì)胞分離液比例為3:2的比例,緩慢將稀釋骨髓液加入到細(xì)胞分離液上層,需保持液面分界清晰。

3)  800g,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,如果有十檔,設(shè)為第三檔)。

4)  小心吸取骨髓單個(gè)核細(xì)胞層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后,管內(nèi)液面從上至下依次為無(wú)細(xì)胞骨髓液層、骨髓單個(gè)核細(xì)胞層、分離液層和紅細(xì)胞層(見(jiàn)圖1)。

 

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圖1 稀釋骨髓液離心前后的分層狀態(tài)圖

 

5)  向離心管中加入10mL 的生理鹽水或PBS重懸細(xì)胞,250g,室溫離心 10min ,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗(yàn)。

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注意事項(xiàng)

1)  不同種屬動(dòng)物單個(gè)核細(xì)胞的比重有一定差異,請(qǐng)選擇合適的分離液進(jìn)行骨髓單個(gè)核細(xì)胞的分離。

2)  骨髓液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,請(qǐng)盡量使用采集后24小時(shí)內(nèi)的骨髓液進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞分離。

3)  為保證細(xì)胞的活力,整個(gè)操作過(guò)程請(qǐng)輕柔,避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

4)  為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請(qǐng)盡量縮短整個(gè)試驗(yàn)的周期。

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臍帶血單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒

IPHASE/匯智和源針對(duì)不同種屬動(dòng)物骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離的特點(diǎn),開(kāi)發(fā)了對(duì)應(yīng)的單個(gè)核細(xì)胞分離試劑盒,包括人,猴,犬,大鼠,小鼠,兔,豬等。該試劑盒包含單個(gè)核細(xì)胞分離液和洗滌液兩個(gè)組分,各成分對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,不會(huì)影響細(xì)胞的原始狀態(tài);同時(shí),該試劑盒操作簡(jiǎn)單便捷,可大大縮短細(xì)胞分離時(shí)間,分離所得細(xì)胞純度高、狀態(tài)好、得率高。

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