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微核試驗(yàn)方法原來是這樣的

更新時(shí)間:2022-03-22      點(diǎn)擊次數(shù):2661
  微核試驗(yàn)是遺傳毒性研究的標(biāo)準(zhǔn)組合試驗(yàn)之一,廣泛應(yīng)用于食品、化工、藥品、農(nóng)藥、飲用水等多種產(chǎn)品的遺傳毒性評(píng)價(jià)。與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相比,體外微核試驗(yàn)更簡單快捷,避免了動(dòng)物個(gè)體差異的影響,靈敏度高。體外微核試驗(yàn)主要包括體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)、人外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)、肝原代細(xì)胞微核試驗(yàn)等。
  體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)是一種基因毒性試驗(yàn)方法,用于檢測哺乳動(dòng)物細(xì)胞在處理后是否產(chǎn)生微核。本試驗(yàn)適用于檢測有絲分裂細(xì)胞在暴露于受試物期間或之后引起染色體斷裂和誘導(dǎo)非整倍體的能力。如果3H~6h短期治療的檢測結(jié)果為陰性或不確定,則需要進(jìn)行無代謝激活系統(tǒng)的長期治療試驗(yàn),相當(dāng)于受試物處理細(xì)胞1.5~2.0個(gè)正常細(xì)胞周期。
  1、受試物
  固體測試物質(zhì)應(yīng)溶解在合適的溶劑中并稀釋至合適的濃度。液體試驗(yàn)物質(zhì)可直接使用或稀釋至適當(dāng)濃度使用。供試品應(yīng)無菌并準(zhǔn)備使用,否則必須確認(rèn)儲(chǔ)存不會(huì)影響其穩(wěn)定性。
  2、細(xì)胞
  可選擇倉鼠肺細(xì)胞系(V79、CHL)或卵巢細(xì)胞系(CHO)、小鼠淋巴瘤細(xì)胞系(L5178Y)、人外周血淋巴細(xì)胞系(如TK6)和原代培養(yǎng)細(xì)胞。推薦使用CHL細(xì)胞系或chl78l細(xì)胞系。細(xì)胞在使用前應(yīng)檢查染色體數(shù)目穩(wěn)定性和支原體污染。
  3、測試方案的選擇
  實(shí)驗(yàn)分為兩種方案:使用和不使用cytob。
  方案一:
  細(xì)胞用待測物質(zhì)處理后,在有絲分裂前使用cytob,然后觀察和分析完成有絲分裂的細(xì)胞(雙核細(xì)胞)的微核率。選擇人淋巴細(xì)胞時(shí),推薦方案一,因?yàn)椴煌瑏碓吹募?xì)胞周期不同,并非所有細(xì)胞都對(duì)植物血凝素(PHA)有反應(yīng)。
  方案二:
  在沒有cyb的情況下,用受試物質(zhì)處理后觀察和分析細(xì)胞的微核率。如果有證據(jù)表明受試物干擾了cytob的活性,或cytob可能影響細(xì)胞的生長(如小鼠淋巴瘤細(xì)胞系),推薦方案II。
  4、劑量
  至少應(yīng)設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)劑量。當(dāng)供試物劑量至少為2~3時(shí),可將最大劑量設(shè)定為最大劑量;當(dāng)存在細(xì)胞毒性時(shí),劑量范圍應(yīng)為55%至5%細(xì)胞毒性至幾乎無細(xì)胞毒性。
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